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腹瀉病毒抗體的試驗原理及樣本要求
更新時間:2019-09-24 點擊量:2444
      腹瀉病毒抗體的試劑盒采用雙抗原夾心法測定血清或血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)。用純化的豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)抗原結合,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)的存在與否。
  腹瀉病毒抗體的樣本處理及要求:
  1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
  2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
  3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
  4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
  7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

滬公網安備 31011802001677號

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